传统的PCR检测试剂通常包含反应液、酶液以及引物探针，形式为三管分装，或以“A+B”的方式进行两管提供。在每次检测前，操作人员需要计算用量并将各组分振荡混匀后使用。这种操作方式不仅复杂、易出错，还对操作人员的技能提出了较高的要求。此外，试剂需“现配现用”，过量配制则容易造成浪费，并且配制过程容易引入污染。虽然这种“A+B”形式在常规检测中尚可满足需求，但随着新冠普筛的推广及各大厂商国际市场的扩展，分子检测市场对RNA一管式液体全预混反应液（即RNA全预混，反应液、酶液及引物探针提前预混在一管中）的需求日益增加。

RNA全预混的优势在于避免客户终端的配制过程，从而简化了操作并降低了错误概率。同时，RNA全预混展现出了极高的稳定性，便于国际推广和运输保存。然而，目前市场上缺乏稳定且具有普遍适用性的RNA全预混原料。行业中仅有少数企业能够开发RNA全预混项目，而这些试剂的稳定性仍面临挑战，并且适配的项目非常有限；同时，其开发路径通常需要舍弃快速检测性能或者制作定制版试剂，不具备普适性。

在全预混体系中，除模板外的所有组分（如酶、镁离子、dNTPs、引物探针）都已经预先混合。然而，在长期保存过程中，引物之间及引物与探针之间容易形成二聚体或二级结构，这不仅导致非特异性扩增，还增加了反应体系的复杂性，限制了主反应的进行并消耗反应所需的组分。这会导致加速后扩增曲线的荧光强度下降，以及Ct值变化异常，显著提升假阳性的概率。尽管降低各主要成分的用量可以在一定程度上提高试剂短期稳定性，但同时会影响试剂性能，尤其是在快速检测方面，这种方法并不可取。

目前RNA全预混面临的主要技术瓶颈有以下三点：

• 功能性酶液活性封闭不完全： TaqDNA聚合酶的聚合和切割活性未完全封闭，以及逆转录酶在低温和室温下活性未完全封闭，导致全预混试剂的稳定性存在问题。
• 长期保存中酶液活性下降： 酶活性严重降低或失活，会导致全预混试剂性能问题。
• 引物探针间的二级结构形成： 引入引物探针后，长期保存或加速过程中引发的二聚体或二级结构增加了反应复杂性，进而影响试剂的稳定性。

因此，如何构建一个稳定且广泛适用的RNA一管式液体全预混反应液MIX（简称：RNA全预混）是分子诊断行业亟待解决的问题！为了应对行业发展趋势，尊龙凯时积极研发全预混试剂，围绕TaqDNA聚合酶、热启动逆转录酶、反应体系及耗材进行充分的验证和优化：

1. TaqDNA聚合酶（抗体修饰）： 推进适配全预混的热启动TaqDNA聚合酶研发，确保其聚合和切割活性完全封闭，同时在反应时迅速失活。
2. 热启动逆转录酶（核酸适配体修饰）： 确保在低温或常温下逆转录酶的活性几乎完全封闭，同时提高其稳定性。
3. 反应体系优化： 采用DOE方法优化反应体系，降低引物探针形成二级结构的概率，同时提高试剂检测率。
4. 耗材优化： 确保所用耗材不会导致酶活性下降或吸附引物。尊龙凯时对市面上主流耗材进行了筛选，以确定最佳适配全预混的耗材。

尊龙凯时还进行了深入研究，以抑制早期二聚体的形成，确保试剂的长期稳定性和优异性能。此外，为了更好地满足客户需求、提升试剂性能及适配性，尊龙凯时建立并验证了涵盖呼吸道、血液、肠道、兽用等领域的多达上百个靶标的体系以及严格的考核标准，以不断优化RNA全预混试剂的各项性能。

截至目前，尊龙凯时的RNA全预混试剂已成功突破技术瓶颈。在37°C的稳定性可达10天，并展现出广泛的适用性，能够直接匹配市场上绝大多数项目，在确保高灵敏度及兼容快速程序的前提下，提供市场上最优的稳定性。该试剂已经通过多家国内知名企业的内部测试，成为国内首家能够大规模供应广泛适配的RNA全预混试剂的企业。

尊龙凯时的RNA全预混产品及服务包括：

• RNA全预混试剂（可立管版本和预分装版本）
• DNA全预混试剂（可立管版本和预分装版本）
• 全预混的热启动TaqDNA聚合酶（抗体修饰）
• 全预混的热启动MMLV逆转录酶

同时，尊龙凯时还可以提供试剂定制调优、引物探针定向设计及调优等CRO服务，以进一步满足客户需求。